제 5 장  키틴, 키토산의 동물에의 친화성

키틴, 키토산이 창상 치유효과가 있다는 것은 알려져 있는데, 그 메커니즘에 대해서는 알려지지 않은 것이 많다. 키틴 및 키토산을 실, 스펀지, 분말, 폴리에스테르 부직포와의 복합체 등으로 가공하여 개, 고양이, 소, 말 등에 있어서 각종 임상 예에 사용함으로써 發赤, 熱感, 疼痛 등의 부작용이 없고, 진통효과, 양호한 육아조직의 增生과, 키틴에 대해서는 상피형성, 키토산에 대해서는 化膿방지에 우수한, 흉터 없는 피부재생을 동반하는 창상치료가 보고되었다. 또한, 키틴 유도체에 있어서도 흥미 있는 생물활성이 나타났는데, 본 장에서는 창상치유의 관점에서 포유동물을 중심으로 키틴, 키토산의 동물에의 친화성에 대해서 소개한다. 또한, 생체에 대해 좋은 현상을 나타내는 요인을 생체친화성이 있는 것으로 하였다.

동물이 손상을 받을 경우 자기 회복하는 능력이 있는데, 그 기능을 다음과 같이 정리 할 수 있다.

① 출혈과 동시에 일어나는 혈소판의 활성화에 의한 혈전의 형성에 의한 지혈

② 출혈된 혈액의 凝血塊의 형성에 의한 이단조직 間隙의 충진

③ 피브린넷트의 형성에 의한 피하 매트릭스의 연결

④ 손상을 받은 주변의 혈관내피세포 표면에 있어서 백혈구 접착인자의 발현 및 염증성

세포의 동원과 활성화

⑤ 혈관의 투과성의 충진에 의한 혈장의 침출

⑥ 마크로파지의 遊走와 異物巨細胞化

⑦ 세균의 업소닝化와 貧食細胞에 의한 포식

⑧ 괴사조직의 자기정화

⑨ 線維芽細胞의 활성화에 의한 콜라겐의 생산

⑩ 遊走細胞로부터의 생리활성물질의 생산

⑪ 혈관신생에 의한 조직에의 산소공급

⑫ 良性肉芽組織의 형성

⑬ 筋線維芽細胞에 의한 創의 축소

⑭ 상피세포의 재생과 再表皮化

⑮ 過剩肉芽組織의 흡수

이들 기능의 결손은 부분적일지라도 외적의 침입을 받으면 창상은 치유될 수 없다. 키틴, 키토산이 이러한 인자의 무언가를 촉진하고, 나아가 창상치유의 기본적인 기능을 저지하지 않는 다고 하면 생체에 청소부와 같은 생체 친화성을 갖고 있는 물질이라고 할 수 있다.

5. 1  생체 내 거동에서 본 생체 친화성

동물의 피하에 키틴 제재를 매설하고, 그 조직반응에 관한 보고는 몇 가지 있는데, 모두 생체에 대해서 양호한 친화성이 보고되었다. 갑오징어뼈 유래의 키틴 스펀지를 개의 分離, 露出된 筋膜 위에 놓고, 그 위를 피하조직으로 덮어 흡수성 실로 봉합하고, 이어서 피부를 봉합하였다. 항생물질은 사용하지 않았다. 7일 째에는 선유아세포의 增數가 보여졌고 혈관에 많은 육아조직이 형성되어 그 조직 내에 多核巨細胞가 인지되었다(그림5.1, 그림5.2(a)). 14일 째에는 혈관에 많은 육아조직이 中等度∼重度로 형성되어 다핵거세포도 다수 출현하였다(그림5.2(b)). 28일 째에는 염증성 세포 및 다핵거세포는 소실하였고, 정상조직 구축이 관찰되었다(그림5.2(c)).

염증 세포 및 선유아세포 스코어 : 판정기준 (各 視 野 中)	다핵거세포 스코어 : 판정기준 (10 視 野 中)	신생혈관 스코어 : 판정기준 (10 視 野 中)
0 : 0개 1 : 1∼3개 2 : 4∼9개 3 : 10개 이상	0 : 0개 1 : 1∼3개 2 : 4∼6개 3 : 7개 이상	0 : 0본 1 : 1∼3본 2 : 4∼6본 3 : 7본 이상

그림 5. 1  키틴 스펀지 埋設部 주변의 조직 소견

키틴-NWF/P(갑오징어뼈 유래의 키틴과 폴리에스테르 부직포와의 복합체)를 개의 피하에 매립했을 때의 육안적 및 조직소견은 매설 후 18일 째에 키틴-NWF/P는 완전히 피하조직으로 取□되어 신생혈관의 침입도 관찰되었고, 주위 조직에는 적색의 육아조직이 형성되었다. 한편, 대조 군으로는 백색의 육아조직이 NWF/P(폴리에스테르 부직포) 주위에 관찰되었고, NWF/P에의 혈관신생은 육안적으로는 보이지 않았다.

키토산 솜을 소에 매립했을 경우, 매설부위의 피부에 있어서 腫脹, 熱感, 疼痛, 波動의 염증 관한 소견은 전혀 인지되지 않았다. 키토산 매설 1주간 째에는, 매설한 키토산 섬유를 取□했듯이, 피브린넷트워크가 형성되어, 수많은 다형핵백혈구가 集簇되고, 近隣의 조직에 있어서는 線維芽細胞의 活性像이 인지되었다. 2주 째에서는, 다형핵백혈구의 집족상은 소실되었고, 키토산 섬유의 주위에 이물거세포가 관찰되었으며, 혈관을 동반하는 새로운 조직이 재구축 되었다.

그림 5. 2  키틴 스펀지 매설부 주변의 조직 소견

5. 1. 2  생체 내 소화성

개에 매설한 키틴 스펀지는 7∼17일 이면 흡수되어 소실되었다(표5.1). 매설 후 익일부터 그 부위에 고도의 血腫을 형성한 일례에서, 스펀지는 매설 후 4일 째에 완전히 소실되었다. 스펀지를 매설한 주변의 조직은, 4일 째에 특히 현저한 변화는 보이지 않았으나 7일 째 및 14일 째에는 스펀지 접촉면에 적색육아조직형성이 나타났다. 그러나, 28일 째에는 매설 부위는 육안적으로 정상적인 조직이었다.

표 5. 1  개의 피하에 매설한 키틴 스펀지의 생체 내 소화성

No.	매 설 주 기 (일)
1 2 3 4 5	4 - + + +++ +	7 ++ ++ ++ +++ +++	14 +++ ++ +++ +++ +++	28 +++ ++ +++ +++ ND

(주)  - 변화 없음,  + 형성이 崩壞되어 겔 상태가 됨, ++ 약간 잔존,

+++ 소실, ND  검색되지 않음.

키토산은 소의 체내에서는 1주일 째에 새롭게 형성된 육아조직의 중심에 점조한 膿汁상태의 물질로써 관찰되었는데, 2주일 째에는 중심부까지 육아조직형성이 인지되어 소실되었다. 키토산 섬유의 굵기는 1주일 째의 약 1/2로 감소되었다. 3주일 째에 있어서도 2주 째의 소견과 거의 변화는 보이지 않았다.

키틴의 생체 내에 있어서 대사 경로는 먼저 라이소자임에의해 키틴올리고머까지 분해되고, 이어서 □-N-아세틸글루코사미니다제에 의해 단당인 GlcNAc(N-아세틸글루코사민)으로 분해된다. 생성된 GlcNAc는 주로, ① 解糖系를 거쳐서 CO2로써 배출되는 경로, ② 글리코프로테인으로써 생체 내에서 재 이용되는 경로, ③ 尿중에 그 자체의 형태로 배출되는 경로에 의해 대사되어, 글리코겐으로써 간장에 남아있는 것은 겨우 0.2%이라는 것이 알려져 있다. 한편, 키토산을 분해하는 효소로써는 키토사나제가 있는데, 미생물을 유래로 하는 것이 많고, 동물 체내(특히, 키틴 골격을 갖는 생물을 식용으로 하는 동물)에 있어서는, 위나 장 등의 소화기계에 키틴, 키토산 분해효소를 갖고 있다. 부분 탈아세틸화 키틴의 in vitro에 있어서 란백 라이소자임 受容性은 탈아세틸화도 90%이상에서는 거의 인지되지 않았다(그림5.3). 키틴은 그 결정구조와는 상관없이 란백 라이소자임에의한 분해성이 낮다(표5.2).

그림 5. 3  부분 탈아세틸화 키틴의 란백 라이소자임 분해성

회전점도계, 0.4M 초산 완충액(pH4.5), 온도 37℃,

기질농도 9.1□/□, 라이소자임 농도 0.57□/□

표 5. 2  각종 효소에 의한 키틴의 분해*1

키틴	효소 (□·□-1)	완충액*2 (□)	생성된 환원당 (□·□-1)	수율*3 (%)
오징어 뼈 오징어 뼈 오징어 뼈 새우 껍질 새우 껍질 새우 껍질	라이소자임 0.57 라이소자임 1.14 라이소자임 0.57 라이소자임 0.57 라이소자임 1.14 라이소자임 0.57	22 33 10 22 33 10	77.4 98.4 6,290.0 25.2 40.2 2,060.0	0.9 1.1 69.0 0.3 0.4 23.0

(주)  * 1  키틴 농도 9.1□/□, 시간 5일간, 온도 37℃.

* 2  완충액 : 0.1M 인산 완충액, pH=7.5

* 3  수율(%) = 생성된 환원당량/N-아세틸글루코사민 잔기의 mol수

표 5. 3  키토산올리고머에의한 혈청 라이소자임의 활성화

투여한 기질*1	혈중 라이소자임 활성(혈청 1□당 unit 수) 최종 투여일로부터의 일수
	일일째	3일째	5일째	7일째	60일째
생리식염수(컨트롤)*2 키토산올리고당*3 키틴올리고당*4 갈락토사민올리고당*5	4.4±1.2 9.2±2.2 4.4±1.5 4.5±0.9	4.4±2.0 7.7±2.2 3.7±1.6 4.4±0.8	n. d.*6 6.9±2.24 n. d. n. d.	n. d. 3.7±2.2 n. d. n. d.	4.3±1.2 4.7±2.0 n. d. n. d.

(주) * 1  토끼(체중 3.5∼4.2Kg)에 1일 당 7.1∼8.6□/□으로 기질을 5일간 매일 투여.

* 2  토끼 4마리로 실험.  * 3  토끼 6마리로 실험.  * 4  토끼 4마리로 실험.

* 5  토끼 3마리로 실험.  * 6  決定않됨.

표 5. 4  키틴에의한 생체 내 라이소자임 유도 효과

키틴 스펀지 삽입 위치	라이소자임 량* (□/□)
外鼻道 對孔 上顎洞 전방 上顎洞 후방	0.91±0.42 0.61±0.31 0.26±0.04 0.26±0.04 (평균 0.43±0.16)

(주) *  n=4, 라이소자임은 통상 혈청 중에 4∼15□/□ 존재.

또한, 平野 등은 각종 중합도의 키토산올리고머 혼합물을 토끼에 정맥주사 했을 때, 혈액 중의 라이소자임 활성이 증대된다는 것을 발견하였다(표5.3). 키틴올리고머, 갈락토사민올리고머를 투여해도 활성의 증대는 인지되지 않았다. 더욱이, in vitro에서 토끼의 全血에 키토산올리고머를 첨가해도 라이소자임 활성에 변화를 나타내지 않았다. 永島 등은 키틴 스펀지를 상악동(上顎洞) 수술시의 가제 탐폰(tampon)으로 사용 할 때, 創部에 라이소자임을 많이 함유한 組織球가 많이 불러들여져, 키틴 주위의 라이소자임 농도가 높아진다는 것을 보고하였다(표5.4). 또한, 모르모트에 실험적으로 熱傷을 제작한 키틴막을 부착한 경우에 있어서도, 무 처리군에 비해 더욱 많은 라이소자임 음성의 조직구를 불러들인다는 것이 밝혀졌다. 키틴, 키토산의 동물체내에의 투여에 의해서 일어나는 라이소자임 유도는, 동물체내의 면역계의 활성에 의한 생체 방어기구의 하나라고 할 수 있는데, 아마도 동물이 본래 갖고있는 면역계(특히 마크로파지 등)를 키틴, 키토산이 활성화하여 그 결과로써 마크로파지 등으로부터 라이소자임이 분비되는 것 같다.

5. 2  생체 세포 친화성

5. 2. 1  세포 遊走能

미분말상(평균입경수 미크론) 키틴, 키토산을 항크스液에 현탁(1□/□)시킨 것에 대한 개 PMN(다형핵백혈구)의 유주능을 브라인드웰챔버를 이용하여 평가한 결과를 표5.5에 나타내었다. 개 PMN은, 항크스 완충액(HBSS:컨트롤)에 비해 키틴 현탁액에 대해서 약 8배, 키토산 현탁액(1□/□)에는 약 4배의 유주를 나타내었다. 이들의 유주능에는 혈청을 현탁액으로 첨가하는 것에 의한 相加효과가 인지되었다. 더욱이, 첵카보드 시험에의한 키틴 및 키토산은 化學走化因子인 동시에 화학운동인자이며, 키틴의 경우가 키토산보다 우수한 유주활성을 나타내었다.

표 5. 5  개 PMN 유주능에 미치는 키틴, 키토산 현탁액 및 혈청의 영향

遊走因子	Nucleopore filter 1□2당 遊走細胞數
HBSS 개 혈청 키틴 키틴+개 혈청 키토산 키토산+개 혈청	63±9 209±81 511±20 662±48 205±52 404±79

5. 2. 2  세포 貧食能

표 5. 6  개 PMN의 루미놀 의존성 화학발광에 미치는 키틴, 키토산의 효과

자극물질	피크강도*
	통상혈청	열처리혈청	혈청 무첨가
Zymosan 키틴 키토산	537±22 156±12 270±27	216±5 2±2 1±1	122±13 2±0 2±0

(주)  * 다형핵백혈구 1,000개당 피크강도(Rlu/sec).

개 PMN의 루미놀 의존성 화학발광에 미치는 키틴, 키토산의 효과를 표5.6에 나타내었다. 미처리 혈청 첨가 시의 화학발광량은  자이모잔의 발광량을 100%로 했을 때, 키토산에서는 약 50%, 키틴에서는 약 30%이었다. 그러나, 열처리(56℃, 30분간) 혈청 첨가 시 및 혈청 무첨가 시에서는 키틴, 키토산에 있어서 거의 화학발광을 일으키지 않았다. 이들의 상황 하에서는, 개 PMN은 키틴, 키토산 입자를 빈식하지 않는다는 것을 의미하는 것으로, 열처리(56℃, 30분간)에 의해 용이하게 不活化되는 인자의 존재가 키틴, 키토산 입자를 빈식 할 때에 중요한 요인이 된다는 것을 시사하는 것이다.

5. 2. 3  세포 接着性

선유아세포, 마우스3T6 세포의 着床性은 키틴 필름에서는 세포배양용 폴리스티렌 샬레 만큼은 着床性이 좋지는 않지만(그림5.4), 배양 1일째에는 그림5.5(c)와 같이 세포의 伸展이 보여졌다. 생체의 복강 마크로파지에 外押하는 마우스 마크로파지株는 키틴 필름에서는 세포배양용 폴리스티렌 샬레와 같이, 세포가 충분히 신전하였다(그림5.5(b), (d)). 이들의 결과는, 키틴 필름은 세포친화성이 비교적 양호하고, 세포에 대한 독성이 없다는 것을 나타낸다. 또한, 건강한 사람의 말초혈(末梢血)로부터 Ficoll-Hypaque를 이용하여 분리된 사람 單球는, LPS(리포多糖) 등의 엔도톡신의 자극에 의해 사이토카인의 하나인 IL-1□(인터로이킨-1□:선유아세포의 증식자극인자)의 생산 능이 높아진다는 것이 보고되었다. LPS 非存在 하에 키틴 필름의 위에서 사람 單球를 배양했을 때, 세포 배양용 폴리스티렌 샬레로 배양했을 때에 비해 IL-1□ 생산량은 컸다. 그러나, LPS 존재 하에서는 세포 배양용 폴리스티렌 샬레에 있어서는 LPS 미첨가에 비해 사람 단구의 IL-1□ 생산은 증가했던 것에 비해, 키틴 필름에서는 LPS 첨가효과가 인지되지 않았다(표5.7).

그림 5. 4  3T6 선유아세포의 키틴 필름에 대한 초기접착(세포배양용 샬레와의 비교)

그림 5. 5  선유아세포(a), (c)와 마크로파지株(b), (d)를 세포배양용 샬레(a), (b), 키틴필름(c), (d)를 이용하여 배양한 배양 1일째의 화학현미경 사진(200배)

그림 5. 7  사람 단구의 IL-1□생산 능에 미치는 LPS 첨가 효과

배양조건	LPS 첨가(10□/□)	IL-1□생산능(pg/□)
세포배양 샬레 세포배양 샬레 키틴 필름 키틴 필름	- + - +	95.7±16.4 331.2±45.9 291.8±39.8 287.7±58.3

최근, 해양세균이 N-아세틸글루코사민(단당)을 고정화한 입자에 접착하여, N-아세틸글루코사민(四量□)을 가해 줌으로써 접착을 해리 시킨다고 하는 흥미 있는 보고가 있다. 이러한 것은, 키틴의 분자량에 의해 접착성이 다르다는 것을 시준 하고 있다. 키토산 필름에 있어서는, 谷□이 마우스 피하조직에 의해 樹立한 L세포를 이용하여 실험을 했을 때, 세포접착에 대해서는 15분 째에 80%이었고, 세포증식에 대해서는 약 20시간의 더블링·타임이었다.

5. 2. 4  세포독성과 항균성

개, 고양이 및 소의 임파구에 대해서 키틴, 키토산에 의한 세포수 감소 등도 없이, 세포독성은 인지되지 않았고 또한, 이들 임파구에 대한 마이트젠 효과도 보이지 않았다(표5.8). 또한, 수종류의 株化세포 및 개 선유아세포에 대한 키틴, 키토산의 직접적인 세포독성도 나타나지 않았다.

키틴, 키토산의 세균증식 억제는 탈아세틸화, N-아세틸화도 및 올리고당의 크기에 의해 영향을 받았다(표5.9∼표5.11).

그림5.6으로부터 DAC-80은 E. coli 살균효과를 갖고 있다는 것을 추측할 수 있다.

표 5. 8 소, 고양이 및 개 말초혈 임파구에 미치는 키틴, 키토산의 영향

자극물질	농도 (□/용기)	幼弱化能*
		소	고양이	개
키틴	100 1 0.01	100±4 100±1 100±5	103±10 95±2 99±3	101±5 93±14 97±3
키토산	100 1 0.01	88±18 95±2 97±2	89±6 98±1 100±2	114±29 92±6 105±7

(주)  * 유약화능 : 자극물질 미첨가 시를 100으로 했을 때의 수치.

그림 5. 9  DAC(부분탈아세틸화 키틴)의 세균 증식 억제효과

DAC*1	분자량	최소저지농도*2(MIC)(%)
		Bs	Sa	Se	Pa	Ec	Kp	Pv
DAC 66 DAC 77 DAC 80 DAC 84 DAC 91	190,000 190,000 80,000 190,000 166,000	(1.0)*3 (1.0) 0.5 0.25 0.13	(1.0) 0.5 0.13 0.5 0.25	(1.0) (1.0) 0.13 0.25 0.13	(1.0) (1.0) 0.5 (1.0) 1.0	(1.0) (1.0) 0.13 0.5 0.25	(1.0) 0.5 0.13 0.5 0.13	(1.0) 0.5 0.13 0.5 0.13

(주)  *1  수치는 DAC의 탈아세틸화도를 나타낸다.

*2  Bs : Bacillus subtilis IFO 3025,  Sa : Staphylococcus aureus 209-P

Se : Staphylococcus epidermidis,  Pa : Pseudomonas aeruginosa TMB B17

Ec : Escherichia coli K 12,  Kp : Klebsiella pneumoniae B20

Pv : Proteus vulgaris HD OXK

*3  괄호는 그 농도에 있어서 균의 증식억제가 인지되지 않은 것을 나타낸다.

표 5. 10  NTM-DAC(DAC의 N-트리메칠화 유도체)에 의한 세균증식 억제 효과

NTM-DAC*1	치환도*2	최소저지농도*2(MIC)(%)
		Bs	Sa	Se	Pa	Ec	Kp	Pv
NTM-DAC-66 NTM-DAC-77 NTM-DAC-80 NTM-DAC-84 NTM-DAC-91	0.1 0.2 0.2 0.2 0.1	0.5 0.25 0.1 0.03 0.06	(1.0)*4 0.25 0.2 0.13 0.06	1.0 0.13 0.2 0.06 0.06	(1.0) 0.5 0.2 0.25 0.13	(1.0) (0.5) 0.3 0.5 0.25	(1.0) 0.25 0.3 0.25 0.13	1.0 0.13 0.2 0.13 0.06

(주)  *1  수치는 탈아세틸화도를 나타낸다.

*2  N-트리메칠기의 치환도(원소분석에 의해 결정).

*3  균의 약호는 표5.9를 참조.

*4  괄호는 그 농도에 있어서 균의 증식억제가 인지되지 않은 것을 나타낸다.

표 5. 11  CO(키토산올리고당)에 의한 세균 증식 억제 효과

CO	분자량*2	최소저지농도*2(MIC)(%)
		Bs	Sa	Se	Pa	Ec	Kp	Pv
CO-1 CO-2 CO-3 CO-4 CO-5*4 GlcN-HCl*5 GlcNAc*5	12,000 8,000 4,000 2,000 4,000 215 221	(5.0)*3 (5.0) (5.0) 1.3 (5.0) (5.0) (5.0)	(5.0) (5.0) 5.0 1.3 (5.0) (5.0) (5.0)	5.0 (5.0) 5.0 1.0 (5.0) (5.0) (5.0)	5.0 5.0 5.0 5.0 (5.0) (5.0) (5.0)	(5.0) (5.0) 5.0 2.5 (5.0) (5.0) (5.0)	(5.0) (5.0) (5.0) 5.0 (5.0) ND*6 ND	5.0 (5.0) 2.5 5.0 (5.0) ND ND

(주)  *1  겔 여과 크로마토그라피로 측정.

*2  균의 약호는 표5.9를 참조.

*3  괄호는 그 농도에 있어서 균의 증식억제가 인지되지 않은 것을 나타낸다.

*4  CO-3의 N-아세틸화합물.

*5  GlcN·HCl : D-글루코사민염산염, GlcNAc : N-아세틸-D-글루코사민.

*6  결정되지 않음.

	그림 5. 6 DAC80에 의한 E. coli의 증식억제효과 E. coli를 5□/□의 DAC80을 함유한 배양액 중에서 0시간(●), 1시간(○), 3시간(△), 24시간(▲) 및 48시간(□) 배양하였다. 그 후, 100□의 배양액을 DAC80을 함유하지 않은 배양액에 첨가하였다. 세균의 증식은 흡광도(600nm)로 측정하였다.
DAC 80 제거후의 배양일수

5. 3  창상치유 효과

창상치유에 있어서 창의 건조방지는 감염방어의 면에서 가장 중요한 요점의 하나이다. wound dressing의 조건으로써는, 손상면에의 자극이 최소일 것, 밀착성이 높고 박리(剝離)가 용이할 것, 침출액의 배제가 고율(高率)일 것 등이 기본적인 조건으로써 요구된다. 키틴은 종래의 건조 돈진피(豚眞皮)와 비교하여 확실히 以上의 점에서 우수하다는 것이 알려져 있는데, 친화성을 논할 때 키틴, 키토산을 이용하여 만든 형상에 관해서 피복효과를 검토할 필요가 있다고 생각된다.

키틴 필름의 사람에의 응용에 대해서는 많은 보고가 있다. 大浦와 皆川은 29例의 皮膚採皮創에 응용한 동결건조 돈진피와의 하프사이드테스트 결과, 창에의 밀착도는 40%가 양호한 결과를 나타내었지만, 17.2%는 양호하지 않은 결과를 보고하였다. 한편, 大島 등은 같은 검토를 36例에 실시하여, 2例 이외에는 양호한 密着度가 얻어졌다고 보고하였다. 개에의 응용에 있어서는, 필름의 형상에서는 비교적 완만한 운동에도 필름의 이동 때문에 본래의 피복기능을 유지하는 것이 어렵지 않고 플레이크, 스펀지, 면과 같은 플렉시빌러티가 우수한 형상이 목적인 피복효과를 유지할 수 있고, 생체 친화성이 더욱 높다고 평가할 수 있다(표5.12).

키틴 및 키토산을 피하 매설한 경우, 혈관의 투과성 항진에 의해 침출된 혈장성분이 피브리네트워크를 형성함과 동시에 왕성한 다형핵백혈구의 침윤이 시작된다는 것이 조직학적으로 관찰되었다. 그러나, 이 경우 적혈구의 침윤(출혈)이 전혀 인지되지 않고, 고도의 염증에 따른 단순한 혈관투과성의 항진만으로는 설명이 안된다. 키틴 또는 키토산의 매설에 의해 확실히 염증이 발생되는데, 이 부위에 따라 선택적으로 다형핵백혈구가 유도된다는 것이 유추된다. 한편, 단핵세포인 마크로파지도 유도되며, 이 創腔에 유도된 마크로파지는 키틴 및 키토산 섬유를 에워싸듯이 이물거세포로 변화하였다. 그러나, 결핵균이 주위에 보여지는 것과 같은 육아종을 형성하는데 에는 이르지 않고, 이물반응으로써도 약하다고 생각된다. 이들 반응과 함께, 선유아세포의 활성화가 조기부터 키틴, 키토산 매설부위에 인지되며, 키틴 스펀지의 소화흡수에 따라 콜라겐이 출현하였다.

키틴-NWF/P, 키토산에 있어서도 잔존하는 섬유의 주위에 육아조직의 형성에 따라 콜라겐의 형성이 인지되었다. 이 형성된 육아조직에는 왕성한 혈관신생이 인지되며, 신생조직에 대한 충분한 산소공급이 이루어지는 것을 유추할 수 있고, 신생된 육아조직은 모두 양성 육아조직이었다. 완성된 육아조직은 콜라겐 선유에 풍부하고 빽빽한 조직인데, 시간의 경과와 함께 과잉의 육아조직은 흡수되어 정상적인 조직과 거의 차이가 없는 조직이 최종적으로 만들어졌다. 키틴 스펀지 매설 14일 째에 키틴은 조직학적으로는 이미 흡수되었는데, 이물거세포는 상당한 수가 존재하며, 이 소견은 과잉의 육아조직의 再吸收像으로 생각되며 흥미 깊은 물질이었다.

키틴, 키토산 양쪽에 공통적으로 언급할 수 있는 것은 매설에 의해 호중구를 주체로 한 이상할 정도의 염증세포를 創腔에 集簇시키는데, 임상적으로는 국소에 전혀 염증반응이 나타나지 않는다는 것이며 또한, 집족한 이들 세포가 膿球로 되어 농창(膿瘡)을 형성하지 않는다는 것이다. 염증세포를 주체로 하는 생체방어 기구는 매우 중요한데, 특히 이 세포의 침윤에 의해 발생되는 통증, 열감(熱感), 종창(腫脹), 농창(膿瘡) 형성은 생체에 있어서 유쾌하지 않은 현상이며, 이들 부작용을 억제하여 방어기구 만을 이끌어 내는 것은 치료에 있어서 이상적인 방법이라고 할 수 있다. 키틴, 키토산은 확실히 부작용 블록의 열쇠라고 생각되며 이 관점에서도 생체의 친화성은 매우 높다고 할 수 있다.

5. 4  안전성으로부터 본 친화성

5. 4. 1  抗凝血性

키틴, 키토산 및 그 유도체를 생체에 적용하려 할 경우, 주의를 요하는 문제 중 하나로 혈액 응고성, 항혈액응고성이 있다. 특히, 헤파린과의 구조적 유사성으로부터 각종 황산화물, 카르복시메칠화물의 합성·항응혈 활성에 관하여 많은 보고가 있으며, 키토산의 적혈구 응집작용에 대해서도 이전부터 알려져 있다. 우수한 總說, 成書도 있으므로, 本 節에서는 1988년 이후의 보고를 중심으로 소개한다.

여러 가지 합성 헤파리노이드는 헤파린의 안티트롬빈Ⅲ와의 결합부위의 구조를 한가지의 표적골격으로 하고 있다. 키틴, 키토산의 변환법으로써 가장 주목받는 진보는 위치선택적 치환기 도입법의 등장이다. 이들의 예에 있어서 균일계에서의 변환은 정밀한 분자설계를 가능하게 하여 반응성이 높은 일급 수산기를 가진 채로 반응성이 낮은 이급 수산기를 치환하는 것도 가능하여 여러 가지 유도체의 위치 선택적 합성에 의한 생물활성의 통계적 연구의 길이 열리게 되었다. 현 시점에 있어서 의료용 재료로써 실제로 생체에 적용되는 것은 키틴, 키토산의 각종 유도체보다도 오히려 키틴, 키토산 그 자체인 것이 많다.

55∼68% 탈아세틸화 키틴으로 코팅 할 경우, 글라스 표면보다도 全血 응고시간이 길다는 것이 보고되었다. 특히, 키토산 초산염과 같은 염으로 코팅하면, 이 효과는 크다. 그 기서에 대해서는 헤파린이 APTT(활성화 부분 트롬보플라스틴 시간)와 TT(트롬빈 시간)의 양쪽을 길게 하는 것에 비해 키토산염은 APTT만을 길게하여 프로트롬빈 시간이나 TT에는 효과를 나타내지 않는 점으로부터, 주로 內因性 응고 경로가 키토산염 보다 저해된다고 생각된다. 이것은, 키토산 초산염이 혈액 응고인자 Ⅷ과 Ⅸ에는 영향을 주지 않고 □과 □의 활성을 각각 65%, 50%로 저하시키는 사실로 符合된다. 혈액 응고 인자 □, □의 활성화에는 負電荷를 가진 표면이 필요한데, 키토산염으로 코팅함으로써 그 負電荷가 중화된다고 생각된다. 이들의 효과는 폴리에스테르製의 인공혈관을 키토산으로 표면처리 함으로써 헤파린을 이용하지 않아도 개의 복부 대동맥에 이식하는 것을 가능하게 한다. 이식한 후 14개월 후에는 인공혈관을 동맥 內膜과 같은 것이 회복된 것이 관찰되어 생체 친화성의 관점으로부터 주목받고 있다. 즉, 키토산을 잡종 성견 3마리의 頸部(목)피하 몇 곳에 200□/□ 투여하고, 血液凝固系 검사를 했을 때 키토산의 피하투여에 의해서 혈액응고인자에 대해서는 內因的으로도 外因的으로도 영향을 미치지 않는 것이 판명되었다.

5. 4. 2  독성

키틴질은 의료용 재료로써 친화성이 높고 또한, 생체 내에서 분해되어 흡수되는 이점이 있어, 금후 점점 이 방면에서의 개발이 기대됨과 동시에 안전성에 대해서 상세한 검토가 요구된다. 그 평가 항목으로써는 하기와 같은 것이 있다.

① 그 물질이 가진 독성

ⓐ급성 독성, ⓑ아급성 독성, ⓒ만성 독성, ⓓ발암성, ⓔ崔奇性, ⓕ繁殖性, ⓖ의존성

② 그 물질이 가진 항원성

ⓐ급성 알레르기, ⓑ지연형 알레르기, ⓒ국소 자극성

③ 그 물질에 혼입된 불순물에 의한 문제

ⓐ중금속, ⓑ엔도톡신

키토산의 안전성에 대해서는 2, 3가지의 보고가 있는데, 모두 안전성의 면에서 문제가 된 성적은 보고되지 않았다. 瀨尾는 탈아세틸화도 80%의 키토산에 대해서 표 5.13에 나타낸 7항목의 독성을 검토하여, 경구투여를 했을 경우 모두 안전하다고 보고하였다. 共和油脂의 키토산 제품 플로낙에 대해서도 경구투여가 검토되었는데, 투약량이 15g/□/日 이상이 되면 이상이 발현되는데, 이 수치는 설탕의 수치보다도 크므로 문제는 없다고 되어있다. 한편, 경구 이외의 투여방법으로는, 三田이 마우스, 랫트에 대해서 검토하였는데, 마우스, 랫트의 LD50은 경구에서 1.5g/□ 이상, 피하투여에서 10g/□ 이상, 복강 내 투여에서는 마우스에서 5.2g/□, 랫트에서 3.0g/□ 이라고 보고되어있다. 또한, 모르모트의 피부에 대한 알레르기 반응에서 이상은 발현되지 않은 것으로 되어있다.

표 5. 13  키토산(탈아세틸화도 80%)의 안전 시험

시험항목	내 용	결 과	안전성
변이원성	Salmonella typhimurium TA100, 同 TA98을 이용하여, 대사활성을 포함한 복귀변이원성에 대해서 관찰	돌연변이유도성 음성	적 합
급성독성	OECD가이드라인 No.401에 근거하여, 랏트 체중 □에 대하여 시료 2,000□ 경구투여, 육안 및 현미경에 의한 조직학적 소견, 체중변화, 사망 수를 관찰	10마리 중 1마리가 투여 24시간 후에 사망. 단, 이것은 시료가 폐에 흡입되었기 때문이다. 그 외에 대해서는 변화 없음.	적 합
아급성독성	마우스체중 1□에 대하여 10□, 400□, 1,000□을 28일간 경구투여하고 체중변화, 섭식량변화, 뇨검사, 혈액학적검사를 실시	사망예 없음. 해부소견이나 조직중량에 이상이 있는 것은 강제 투여에 의한 스트레스 때문	적 합
만성독성	마우스 체중 1□에 대하여 50□, 200□, 500□을 6개월간 경구투여하고 체중변화, 섭식량변화, 뇨검사, 혈액학적검사를 실시	사망예 없음. 해부소견이나 조직중량에 이상이 있는 것은 피검물질의 독성에 의한 것은 아니다.	적 합
발열성	시료 9g을 생리식염수 270□에 가해 가열추출하고 토끼에 耳靜脈내 투여(10□/□)	발열성물질 음성	적 합
용혈성	시료 9g을 생리식염수 270□에 가해 가열추출하고 토끼 脫纖維血을 첨가(1%)	37℃, 24시간에서 용혈성 인지되지 않음	적 합
알레르기	사람 20명에 30□/日로 2주간 경구내복	--診例, 혈관증상과 함께 음성	적 합

표 5. 14  카르복시메칠키틴나트륨염 수용액(0.25%)의 안전성

항 목	방 법			결 과
	공시동물	투여경로	조 작 법
급성독성 변이원성 피부일차자극성 피부누적자극성 안점막일차자극성 광독성 경피감작성 광감작성 사람 팻치테스트	마우스 - 토끼 모르모트 토끼 모르모트 모르모트 모르모트 사람	경구 - 경피 경피 경점막 경피 경피 경피 경피	- - Draiz 법 Nakajima/Kobayashi 법 Draiz 법 - Maximization/Takase 법 Vinson Borselli/OECD 법 -	LD50Ｂ40□/□ 변이원성 인지 안됨 무자극성 무자극성 무자극성 광독성 없음 감작성 없음 광감작성 없음 무자극성

키틴에 관해서는 Watkins 등이 마우스에 대한 경구투여의 안전성에 대해서 검토했는데, 1g의 경구투여에 의해서도 내장에 이상은 발현되지 않았다고 보고하였다. 또한, 사람의 인공피부로써 개발된 키틴의 부직포(베스키틴W)는 의료용 재료로써 후생성으로부터 허가를 받아 많은 임상 예로부터 안전하다는 것이 알려져 있다. 유도체에서는 0.25%카르복시메칠키틴나트륨염에 대해서 마우스, 토끼, 모르모트에 있어서 안전성과 사람에 있어서 피부 팻치 테스트가 실시되었는데, 모두 안전하다고 하는 성적이 보고되었다(표5.14).

이상과 같이 키틴, 키토산에 관해서는 경구, 피하, 복강투여에 있어서는 설탕 이상의 양에서도 안전하다는 것이 알려졌다. 그러나, 개, 고양이 및 소 등의 대형 동물에 대한 안전성에 대해서는 전혀 검토되지 않았다. 이들 동물에 키틴, 키토산을 피하투여하고 일반 임상증상, 혈액, 혈액응고, 병리조직에 대해서 검토하였다.

표 5. 15  개에 있어서 키토산 대량 투여의 일반상태의 변화

투여량(□/□)	투여부위의 통증	식욕 감퇴	호흡곤란	사망
200 150 100 50 30 10	0/6 1/3 3/3 2/3 0/3 0/3	6/6 2/3 2/3 1/3 0/3 0/3	5/6 2/3 0/3 0/3 0/3 0/3	4/6 1/3 0/3 0/3 0/3 0/3

키틴에 대해서는 어떤 동물에 있어서도 이상은 나타나지 않았다. 그러나, 키토산에서는 부작용의 발현이 개에 있어서 나타났는데, 10일간에서 70%의 개가 사망하였다. 표5.15에 키토산 투여량과 개의 일반상태 변화에 대해서 정리하였다.

개에 대한 키토산 투여량이 30□/□이상에서는 호산구의 감소, 백혈구수의 상승, 혈장LDH(유산탈수소효소)의 상승, 혈장의 CPK(클레아틴포스포키나제)의 상승이 나타났다. 투여로부터 24시간 이내의 변화는 체온이 투여 5시간 후를 피크로 하여 상승하였고, 이것과 동시에 백혈구수, 호산구수, 單球數가 감소하였고, 호중구수는 5시간째부터 서서히 상승하였다. 혈액응고학적으로는 PT(프로트롬빈 시간), APTT는 변화가 없었고 FDP(피브린□ 분해물)수치도 10□/□ 이하였고, TEG(트롬보에라스트그라피)의 各 수치도 정상이었다. 瀨死期의 胸部 엑스레이사진에서는 폐동맥의 확장 소견이 명료하였고, 폐 실질의 에어브로코그람이 관찰되었다. 사망의 원인은 출혈성 폐렴이었고 조직학적으로는 만성 線維素性 폐렴이었다(그림5.7)

(a) 키토산 200□/□ 투여 후 9일째에 있어서 사망예(헤마톡시린에오진 염색) 肺間質의 肥厚, 출혈, 호중구 침윤 및 혈관 관내의 혈구의 充盈 著明	(b) 키토산 200□/□ 투여 후 4일째에 있어서 사망예(PTAH〈린텅스텐酸헤마톡시린〉 염색) 間質에 黑染되는 피브린의 석출이 보인다.
그림 5. 7 폐의 조직 소견

마우스, 랫트의 LD50은 그램오더인데, 개에 있어서는 200□/□이하로 동물 종에 따라 LD50은 분명히 달랐다. 개가 왜 키토산에 대해서 과민한지는 불분명한데, 금후 키틴질의 안전성을 논할 경우에 있어서 개에 대한 성적이 필순 항목이 될 것으로 생각된다. 개 屬의 일종인 너구리에 있어서도 200□/□ 투여예에 있어서 사망 예는 보이지 않았고, 개와 같은 호흡 이상, 식욕의 감퇴가 나타났다(安佐 동물공원, 福本 수의사의 私信). 키토산은 종 특이적으로 폐 조직에 염증을 일으키는 것이 밝혀졌다. 이상의 것으로부터 키토산은 다른 동물에 비해 개 族에 대하여 상당히 높은 친화성을 가지며 과잉의 반응을 일으키는 물질이라고 생각된다.

5. 4. 3  임상 응용으로부터의 안전성 평가

동물에 대한 임상응용은 Allan 등이 1984년에 보고하였는데, 본격적인 임상응용은 南(미나미) 등의 보고로 시작된다. Brzenski 등 및 Carolan 등도 동물에 대한 임상응용을 시도하였는데, 전자는 생체반응검색의 구체성에 문제가 있고, 후자는 아직 실용단계에 이르지 못했다. 이하, 필자 등의 大動物에 대한 응용, 小動物에 대한 응용 및 展示動物에 대한 응용에 대해서 소개한다.

a. 키틴의 임상응용

(ⅰ) 키틴스펀지

키틴 스펀지를 外傷, 농창, 종창 등에 있어서 창면피복 또는 조직 결손, 창공충진에 사용했을 때 질병의 90%가 키틴을 이용하지 않고 행하는 이제까지의 처치와 비교하여 양호하게 치료하였다. 즉, 외상 또는 농창에의해 생성된 조직결손에 대해서는 初診 시 創面을 세정, 소독하고 키틴 스펀지를 압정 또는 충진하는 것만으로 양호한 육아조직 증생 또는 상피형성이 얻어졌고, 과도한 육아조직 증생 또는 瘢痕 형성은 나타나지 않았다. 또한, 동물간에 있어서 효과의 차이는 보이지 않았다. 키틴 스펀지의 창면에 대한 피복으로 현저한 피하조직 및 피부의 조직 수복을 나타낸 개의 예를 그림5.8에 나타내었다. 이 개의 치료에 있어서 항생물질은 일절 사용하지 않았고, 4∼5일 경에 창면의 요오드劑에의한 소독과 새로운 키틴 스펀지의 피복에 의해 거의 만족할 만한 치유경과를 나타내었다

(a) 교통사고에 의해 생성된 前肢의 중한 挫創	(b) 키틴 스펀지에 의한 창의 피복
(c) 1개월 후에 나타난 조직 수복	(d) 가벼운 반흔과 피부의 색소 침착이 인지 되었는데, 전혀 기능장해없이 치료하였다.
그림 5. 8 키틴 스펀지를 응용한 임상예(개)

개의 유방, 精菓, 下顎, 後肢, 항문에 생긴 악성 혼합종양, 비만세포腫, 骨肉腫, 脂肪腫 등을 적출하고 그 創腔에 키틴 스펀지를 충진함으로써 현재 경과 관찰중인 것도 포함하여 수술 후 반년 이내에 재발이 보인 것은 20예 중 1예 뿐이었다. 재발한 1예는 조직학적으로는 골육종으로, 재발한 腫瘍은 피부면에 고착되어 있고, 충진한 키틴 스펀지의 위에 발생하였다. 게다가, 종양의 再적출은 매우 용이하였다. 그 후, 이 症例에 대해서도 재발은 나타나지 않았다.

(ⅱ) 키틴-NWF/P

창면피복재로써 이용한 12예 중 11예(92%), 수술 시에 생성된 창강 또는 외상에 의한 조직 결손부의 충진재로써 이용한 8예중 5예(63%) 및 헤르니아 輪縫合部 보강재로써 이용한 12예 전례(100%), 계 32예 중 28예(88%)에 치유 재발방지 효과가 나타났다. 회음 헤르니아 4예에 있어서는 3예가 이상 없이 치유되었다. 1예는 수술 후 키틴-NWF/P에의 감염을 倂發했기 때문에 키틴-NWF/P를 제거하고, 그 후는 순조롭게 회복되었다. 全例 모두 재발은 나타나지 않았다. 종창 적출 및 혈종의 각 1例의 수술에 의해 생긴 창강 및 외상에 의한 조직 결손 2例에 사용한 결과, 창강에 있어서는 2예 모두 제1기 치유를 나타냈는데, 외상 2예에서는 감염이 유지되었고, 키틴-NWF/P를 제거함으로써 치유되었다. 소의 臍헤르니아 12예에 대해서는 全例에 수술 후 수일간 경미한 종창이 나타났지만 점차 소실되었다. 수술 부위의 화농은 없었고 양호한 치유 경과를 나타내었다. 전예 모두 재발은 없었고 豫後(치료 후 경과)는 양호하였다. 또한, 소의 감염성 蹄皮炎 12예에 대해서 키틴 스펀지를 이용했을 때와 같이 처치를 한 결과, 11예가 1회부터 數回의 치료에서 종래의 처치에 비해 양호한 치유가 나타났다.

(ⅲ) 키틴 綿

키틴 면의 조직 결손부분에의 충진재 또는 창면 피복재로써의 효과를 표5.16에 나타내었다. 20예 중 18예(90%)가 1회부터 數回의 치료에서 양호한 치유 경과를 나타내었다. 특히, 후레그모네에의한 광범위한 피부의 괴사를 생성한 症例에서는 키틴 면을 수일간격으로 피부 결손부분에 피복함으로써 감염도 없고 반흔도 생기지 않고 치유하였다.

표 5. 16  키틴 면의 임상 응용

질병 명	사용목적	개	고양이	합계
외상	조직결손 충진 창면 피복	2/2*1 2/2	2/2 1/2	4/4 3/4
농창	조직결손 충진 창면 피복	6/6 5/5	0/1 -*2	6/7 5/5
합계		15/15	3/5	18/20

(주) * 1  2/2는 2예 중 2예가 치유되었다는 것을 나타낸다.

* 2  症例 없음.

(ⅳ) 키틴 플레이크

키틴 플레이크를 조직결손 충진재로써 이용한 1예(100%) 및 창면 피복재로써 이용한 8예 중 7예(88%) 합계 9예 중 8예(89%)가 창면에 신속하게 --皮를 형성함으로써 치료되었다. 교통사고에 의해 右前肢의 --관절부위 보다 肢端까지의 피부가 결손된 증례에 있어서는 키틴 플레이크를 수일간격으로 散布함으로써 창면에 가피(痂皮)가 형성되어 감염도 없고 반흔도 생기지 않고 종래의 처리에 비해 양호한 치료가 이루어 졌다.

b. 키토산의 임상응용

(ⅰ) 키토산 綿

키토산 면을 소의 감염성 蹄皮炎 38예, 농창 5예, 지간부란(趾間腐亂) 3예, 趾間過形成 2예에 사용했고 그 치유 율은 89%이었다. 감염성 제피염의 5예에 치유되지 않는 것이 있는데, 모두 중상으로 합병증을 갖고 있었다. 개 및 고양이의 감염성 질환에 대한 키토산 면의 효과는 84예 중 79예가 치료되어 치유 율은 94%이었다. 치료되지 않은 농창 3예와 裂創의 1예는 모두 창강 내의 과잉의 키토산 면의 충진이 지적되었다.

키토산 면의 창면에 대한 피복으로 현저한 피하조직 및 피부의 조직 수복을 나타낸 고양이의 예를 그림 5.9에 나타내었다. 이 고양이의 치료에 있어서 항생물질은 초진으로부터 3일간만 사용하였다. 7일에 창면의 요오드劑에 의한 소독과 새로운 키토산 면의 피복을 2회 반복했을 때, 노출된 뼈는 새롭게 생성된 양성 육아조직에 의해 완전히 피복 되었고 그 후, 항생물질 연고와 부신피질 호르몬 연고의 도포로 거의 기능장애를 없앤 치유경과를 나타내었다.

(ⅱ) 키토산 현탁액

키토산 현탁액은 소에 대해서는 유방염(급성기의 것 12예, 만성기의 것 14예)에 사용하였다. 효과 판정에 대해서는 乳汁 중의 체세포수가 500,000cells/□ 이하로 감소하였고, PL 테스터(유방염 간이 진단액)가 陰轉되는 것을 기준으로 하였다. 급성 유방염 12예는 2∼10회 乳槽 내에의 주입으로 모두 치유되었다. 키토산의 사용량은 1.5∼15□이었다. 만성 유방염 14예도 3예를 제외하고 치유되었다. 치유된 것은 15일 이내에 체세포수가 500,000cells/□로 감소하였다. 즉, 체세포수가 감소되지 않은 2예에 있어서는 그 乳汁으로부터 대장균이 분리되었다. 키토산은 유방이라고 하는 腺組織에 대해서도 조직의 활성화를 이끌어낸다는 것이 밝혀지게 되었다. 개 및 고양이에 대해서는 농창 14예, 咬創 18예, 裂創 2예, 膿胸 1예, 합계 25예에 응용하여 100%의 치유율을 얻어냈다.

(ⅲ) 展示動物에 대한 응용

동물원 및 수족관에서 사육되고 있는 전시동물에 대해서 키토산 면 및 키토산 현탁액의 치유효과에 대해서 표 5. 17에 정리하였다. 협력을 준 시설은 安佐 동물공원, 秋吉台 사파리 파크, 도베 수족관, 노이찌 동물원, 바다의 中道 동물원, 히비끼 동물월드, 福岡 동물원, 九州 동물원, 피닉스 동물원, 高知 동물원, 名護 동물원, 池田 동물원 및 官島 수족관이다.

표 5. 17  전시동물에 대한 키토산의 응용

동 물 종	질 환	사용횟수	효과	동 물 종	질 환	사용횟수	효과
[포유강] 有袋目 아카캥거루×3 원뱃트 貧齒目 오오아리크이 靈長目 와오끼쯔네원숭이×2 볼리비아리스원숭이 일본원숭이 아비시니아코로부스 도케라히히	농창 挫創 --창 挫創 골절 농창 咬創	2 1 1 2 2 1 1 1	著□ 저효 저효 저효 유효 저효 유효 유효	[포유강] 偶蹄目 쿈 산양×2 아미메 기린 바바리 시프×2 다마시카 후타코부라쿠타 缺齒目 카파바라 토끼目 토끼×6	좌창 감염수술창 개방골절 농창 좌창 농창 임파節炎 농창	3 1 1 1 1 4 2 2	유효 저효 유효 저효 저효 저효 유효 저효
食肉目 키타키쯔네 혼도타누끼×3 아라이곰 하나지로하나곰×2 하쿠비신×3 사자 치타 카스피카이아자라시 長鼻目 아프리카코끼리	수술창 좌창 --창 교창 좌창 농창 --창 농창 농창	1 1 5 1 3 1 3 2 2	저효 저효 무효 (노쇄) 유효 저효 저효 무효 (쇄약) 저효 유효	[조강] 후라싱고目 치리 우라싱고 매目 흰배바다독수리 물오리目 혹 백조 캐나다 기러기 올빼미目 올빼미 꿩目 산케이	화농성관절 염 좌창 刺創 좌창 골절 농창	1 3 3 1 1 6	효과 무효 유효 유효 유효 무효
奇蹄目 말×2 하이락스目 케이프하이락스	프레그 모네 교창	1 2	저효 저효	[--충강] 有鱗目 비단뱀	농창	3	저효

(주)  효과 판정 기준

著□ : 화농창 또는 다른 치료법에 반응하지 않은 창에 키토산을 사용하여 급속하게

치유된 것.

有□ : 新鮮 창에 사용하여 치유 또는 화농창에 항생물질과 함께 사용하여 치유된 것.

□果 : 창의 일부에 치유 轉歸는 보이지 않는 것. 유효하다고는 판정 할 수 없는 것.

무효 : 창에 치유기전을 나타내지 않는 것.

(a) 교통사고에 의해 생긴 左前肢의 中度 挫創과 中手骨의 골정	(b) 키토산면에의한 창의 피복
(c) 13일 후에 나타난 양호한 육아조직형성	(d) 아주 희미한 상흔만이 보이며 전혀 기능 장해 없이 치유되었다.

그림 5. 9  키토산면을 이용한 임상例(고양이)

哺乳綱 43頭 중 著□ 24頭, 有□ 12頭에서 확실한 효과가 인정된 것이 83.7%이었다. 無□인 것은 5예(11.6%) 이었는데, 모두 동물의 쇄약 정도가 현저하여 치료대상 외에 해당되는 것이었다. 鳥綱 6예 중 著□를 나타낸 것은 없고 유효가 4예(66.7%), 무효가 2예(33.3)이었다. 파충강(爬□綱)은 비단뱀 1예 뿐이었지만 현저한 효과가 있었다. 치료 횟수는 1회가 27예(54%), 2회가 12예(24%), 3회가 6예(12%), 4회 이상이 5예(10%) 이었다. 효과 판정에 요구된 일수는 체중이 무거울수록 길어지는 경향을 나타내었다(소 8개월, 캥거루 2.5개월). 鳥綱의 성적이 다소 안 좋은데, 例數가 적으므로 더 많은 검토가 필요하다. 哺乳綱에서는 동물目 사이에 있어서 相違한 것은 없었다.

야생동물에 가까운 전시동물의 경우 식육 동물이나 반여(伴侶) 동물과 비교하여 핸들링이 어려워 많은 경우 처리에 있어서 진정 또는 마취가 필요하였다. 또한, 瀕回의 치료는 오히려 동물을 스트레스 받게 하는 결과가 되어 역효과를 가져왔다. 이들 동물에서의 성적은 직접적인 本물질의 치료능력과 생체 친화성의 평가가 가능하다고 할 수 있다. 키토산 면 또는 키토산 현탁액의 화농창에의 응용에 의해 창 내의 청정화가 발현되고 신속한 육아조직 형성이 인지되어 유효하다고 판정된 것이 83.7%라고 하는 식용 동물의 성적과 거의 같은 결과가 얻어졌다. 이러한 사실은 키토산이 직접 생체에 작용하여 생체가 창 내를 자기 청정화(self-debridgement)함으로써 정상적인 육아조직 형성에 의한 창의 治癒機轉이 일어난 것으로 해석된다.